產品類別：外周血單個核細胞的分離
 
產品編號：LDS10750125
 
產品名稱：人全血單個核細胞分離液 醫用級（細胞培養處理試劑盒 試劑1）
 
產品規格：200ml/瓶
 
產品價格：￥3600.00元
 
 
用于分離人全血單個核細胞分離液  醫用級

樣本密度分離液（人全血單個核細胞分離液）說明書
 
【包裝規格】
 
200ml/瓶
 
【實驗前準備】
 
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。
 
首先根據樣本量大小，分以下幾種情況：
 
一、 使用 15ml 離心管時：
 
情況 A：血液樣本量小于 3ml 時，實驗方法如下：
 

• 取一支 15ml 離心管，加入 3ml 分離液。

 

• 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，400-650g，離心 20-30min（注：根據血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果）。

 

• 離心后，此時離心管中由上至下分為四層。第一層為血漿層。第二層為環狀乳白色單個核細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。

 

• 用吸管小心吸取第二層環狀乳白色單個核細胞層到另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產品編號：2010X1118），混勻細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產品編號：2010X1118）重懸所得細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 重復 6、7、8，棄上清后以 0.5ml 后續實驗所需相應液體重懸細胞。

 
情況 B：血液樣本量為 3-6ml 時，實驗方法如下：
 

• 取一支 15ml 離心管，先加入與血液樣本等量的分離液。

 

• 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，400-650g，離心 20-30min（注：根據血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果，但最大離心力最好不超過 1000g）。

 

• 離心后，此時離心管中由上至下分為四層。第一層為血漿層。第二層為環狀乳白色單個

 
核細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。
 

• 用吸管小心吸取第二層環狀乳白色單個核細胞層到另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產品編號：2010X1118），混勻細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產品編號：2010X1118）重懸所得細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 重復 6、7、8，棄上清后以 0.5ml 后續實驗所需相應液體重懸細胞。

 
二、 使用 50ml 離心管時：
 
情況 A：血液樣本量為 6-10ml 時，實驗方法如下：
 

• 取一支 50ml 離心管，先加入與血液樣本等量的分離液。

 

• 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，500-950g，離心 20-30min（注：根據血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果，但最大離心力最好不超過 1200g）。

 

• 離心后，此時離心管中由上至下分為四層。第一層為血漿層。第二層為環狀乳白色單個核細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。

 

• 用吸管小心吸取第二層環狀乳白色單個核細胞層到另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產品編號：2010X1118），混勻細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產品編號：2010X1118）重懸所得細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 重復 6、7、8，棄上清后以 0.5ml 后續實驗所需相應液體重懸細胞。

 
情況 B：血液樣本量為 10-20ml 時，實驗方法如下：
 

• 取一支 50ml 離心管，先加入與血液樣本等量的分離液。

 

• 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，650-110g，離心 20-30min（注：根據血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果，但最大離心力最好不超過 1200g）。

 

• 離心后，此時離心管中由上至下分為四層。第一層為血漿層。第二層為環狀乳白色單個

 
核細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。
 

• 用吸管小心吸取第二層環狀乳白色單個核細胞層到另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產品編號：2010X1118），混勻細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產品編號：2010X1118）重懸所得細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 重復 6、7、8，棄上清后以 0.5ml 后續實驗所需相應液體重懸細胞。

 
分離圖例
 
 
 
 
【注意事項】
 

• 全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結果，最好在取血 2h 內進行實驗，血液存放時間越長，細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。

 

• 本實驗最好不要使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電、低靜電離心管及未經堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。

 

• 吸取過多的單個核細胞層及分離液層會導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數量增加。

 

• 吸取過多的單個核細胞層上層溶液會導致血漿蛋白及血小板混雜。

• 如所實驗后細胞得率或活性過低，請聯系技術支持以尋求幫助。

 

• 當血液樣本粘度過高需稀釋時，最優稀釋方法：將血液與樣本稀釋液（產品編號：2010C1119）1:1 稀釋混勻備用。注：不當的稀釋方法會降低細胞得率及活性。如血液樣

 
本經過稀釋則分離過程中需適當降低離心力和離心時間。
 
【儲存條件及有效期】
 
18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
 
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現白色結晶，影響分離效果。
 
【參考值（參考范圍）】
 
本實驗淋巴細胞提取率及純度均大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數量及比例，用戶可適當進行參考。
 

	紅細胞		白細胞		血小板
		（4.0-10.0）×109
	（4.0-5.5）×1012				（1.0-3.0）×1011
含量（個/L）		中性粒細胞	淋巴細胞	單核細胞
		50%-70%	20%-40%	3%-8%
【相關實驗技術方案】

 

• 所獲得淋巴細胞的培養技術。

 

• 所獲得淋巴細胞的核酸提取技術。

 

• 所獲得淋巴細胞的鑒定方法A.流式細胞技術B.免疫組化技術C.原位雜交技術

 
D.PCR 技術
 
 
【可能存在的問題及解決方法】
 
1.  由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
 

出現情況

出現原因

建議解決方案

 
離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 轉速過小或離心時間過短 適當增減轉速